La proliferazione è il termine che definisce il processo di crescita delle popolazioni cellulari. Nell’ematopoiesi dei Vertebrati, la cellula staminale trascorre la maggior parte del suo ciclo vitale nello stadio G0 e si divide per produrre il progenitore staminale in grado di proliferare attivamente. In Ciona intestinalis poco si sa circa l’ematopoiesi sebbene, alcuni autori hanno descritto nel faringe zone di proliferazione definite col termine di noduli emopoietici e, per gli emociti cosiddetti linfocito-like, un’attività proliferativa in seguito a stimolazione. In questo lavoro viene riportata l’attività proliferante degli emociti circolanti. Gli emociti sono stati caratterizzati utilizzando un marker della proliferazione, il gene PCNA (Proliferating Cell Nuclear Antigene) già clonato, sequenziato ed utilizzato per sintetizzare una sonda ad RNA per esperimenti di Ibridazione in situ. Al fine di ottenere un arrichimento dei vari tipi emocitari è stata utilizzata la separazione su gradiente di Percoll. Gli emociti cosi ottenuti sono stati caratterizzati attraverso la colorazione di May-Grunwald Giemsa, e l’espressione del gene PCNA è stata valutata tramite RT-PCR. Colture primarie a breve termine sono state allestite con gli emociti derivanti da ciascuna banda di Percoll e la loro vitalità e capacità proliferante è stata valutata tramite saggio MTT. I risultati dell’Ibridazione in situ hanno messo in evidenza che il trascritto del gene PCNA è presente in 4 differenti tipi di emociti: emociti linfocito-like, amebociti ialini e granulari ed URGs (Univacuolar Refractile Granulocytes). Gli esperimenti di RT-PCR hanno mostrato che gli emociti della prima, seconda e quarta banda di Percoll esprimono il gene PCNA. La colorazione MayGrunwald Giemsa ha evidenziato che in tali bande sono presenti prevalentemente emociti linfocito-like (LLC) , amebociti ialini e granulociti. Il saggio MTT condotto sugli emociti separati su gradiente di Percoll ha evidenziato attività proliferante degli emociti della banda B2 (alta percentuale di LLC) e B4 (alta percentuale di granulociti) dopo 12h dall’inizio della coltura.
Pergolizzi, M., Soderhall, K., Soderhall, I., Parrinello, N. (2009). Attività proliferante degli emociti di Ciona intestinalis. In Boll. Mus. Ist. Biol. Univ. Genova, 71, 2009 (pp.178-178).
Attività proliferante degli emociti di Ciona intestinalis
PARRINELLO, Nicolo'
2009-01-01
Abstract
La proliferazione è il termine che definisce il processo di crescita delle popolazioni cellulari. Nell’ematopoiesi dei Vertebrati, la cellula staminale trascorre la maggior parte del suo ciclo vitale nello stadio G0 e si divide per produrre il progenitore staminale in grado di proliferare attivamente. In Ciona intestinalis poco si sa circa l’ematopoiesi sebbene, alcuni autori hanno descritto nel faringe zone di proliferazione definite col termine di noduli emopoietici e, per gli emociti cosiddetti linfocito-like, un’attività proliferativa in seguito a stimolazione. In questo lavoro viene riportata l’attività proliferante degli emociti circolanti. Gli emociti sono stati caratterizzati utilizzando un marker della proliferazione, il gene PCNA (Proliferating Cell Nuclear Antigene) già clonato, sequenziato ed utilizzato per sintetizzare una sonda ad RNA per esperimenti di Ibridazione in situ. Al fine di ottenere un arrichimento dei vari tipi emocitari è stata utilizzata la separazione su gradiente di Percoll. Gli emociti cosi ottenuti sono stati caratterizzati attraverso la colorazione di May-Grunwald Giemsa, e l’espressione del gene PCNA è stata valutata tramite RT-PCR. Colture primarie a breve termine sono state allestite con gli emociti derivanti da ciascuna banda di Percoll e la loro vitalità e capacità proliferante è stata valutata tramite saggio MTT. I risultati dell’Ibridazione in situ hanno messo in evidenza che il trascritto del gene PCNA è presente in 4 differenti tipi di emociti: emociti linfocito-like, amebociti ialini e granulari ed URGs (Univacuolar Refractile Granulocytes). Gli esperimenti di RT-PCR hanno mostrato che gli emociti della prima, seconda e quarta banda di Percoll esprimono il gene PCNA. La colorazione MayGrunwald Giemsa ha evidenziato che in tali bande sono presenti prevalentemente emociti linfocito-like (LLC) , amebociti ialini e granulociti. Il saggio MTT condotto sugli emociti separati su gradiente di Percoll ha evidenziato attività proliferante degli emociti della banda B2 (alta percentuale di LLC) e B4 (alta percentuale di granulociti) dopo 12h dall’inizio della coltura.
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